La afinidad de unión de la biotina con la avidina y sus homólogos se ha utilizado en procedimientos de laboratorio durante décadas.
La avidina es una glicoproteína tetramérica natural que se encuentra en la albúmina del huevo y en los tejidos aviares.
La biotina, también conocida como vitamina B7, es una coenzima molecular de las carboxilasas que se encuentran en todas las células vivas.4 Juntos, forman uno de los enlaces no covalentes más fuertes de la naturaleza y la interacción más fuerte conocida entre un ligando y una proteína.
Esta interacción se produce rápidamente y es extremadamente estable una vez que se forma, estas ventajas han hecho que históricamente la unión avidina-biotina sea el mecanismo preferido para las aplicaciones de inmunohistoquímica (IHC).
La avidina y sus homólogos tienen cuatro sitios de unión para la biotina, la avidina es muy estable, siendo relativamente resistente al calor, a los cambios de pH y a los agentes desnaturalizantes.
Originalmente, los anticuerpos biotinilados y la avidina se utilizaban en los procedimientos de tinción de la IHC, sin embargo, a pesar de las grandes ventajas de la avidina, sus limitaciones han llevado a la popularidad de los derivados de la avidina.
La avidina tiene un punto isoeléctrico relativamente alto de 10.5, lo que significa que tiene una carga neutra neta a un pH de 10,5.
A niveles de pH inferiores a 10.5, la avidina tiene una carga positiva, lo que la hace propensa a interacciones inespecíficas con cualquier componente de carga negativa de las células, esto puede causar problemas de tinción de fondo.
La estreptavidina es un homólogo de la avidina derivado de la bacteria Streptomyces avidinii, al igual que la avidina, se une a cuatro moléculas de biotina con una constante de disociación similar, y es resistente a los cambios de pH, a la degradación enzimática y a los agentes químicos desnaturalizantes, lo que la hace muy atractiva en un entorno de laboratorio, la avidina y la estreptavidina tienen estructuras terciarias y cuaternarias prácticamente idénticas.
Sin embargo, la estreptavidina sólo comparte un 30% de homología de secuencia con la avidina y, a diferencia de ésta, tiene un punto isoeléctrico casi neutro de 5 a 6.3 Como resultado, la estreptavidina es menos propensa a los problemas de tinción de fondo que la avidina.
La línea de detección 4plus de Biocare utiliza la tecnología de tinción con estreptavidina para proporcionar la tinción IHC basada en biotina más limpia y clara posible.
El sistema de detección 4plus utiliza anticuerpos secundarios biotinados con afinidad de unión a la estreptavidina ligada a enzimas.
Se ha colocado un brazo espaciador largo entre la biotina y el anticuerpo secundario, lo que proporciona un aumento significativo de la sensibilidad cuando se combina con conjugados de estreptavidina.
El sistema de detección 4plus puede utilizarse con etiquetas cromógenas de peroxidasa de rábano (HRP) o de fosfatasa alcalina (AP).
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