Para obtener la detección más específica de antígenos mediante inmunohistoquímica (IHQ), es esencial bloquear todos los sitios de unión no específicos.
Para obtener la detección más específica de antígenos mediante inmunohistoquímica (IHQ), es esencial bloquear todos los sitios de unión no específicos.
Incluso un anticuerpo con alta especificidad para su objetivo puede enfrentar desafíos, ya que las fuerzas intermoleculares pueden promover la unión no específica a otros moléculas.
Si estos sitios no específicos se dejan sin bloquear, los anticuerpos y el sistema de detección pueden unirse, lo que lleva a una tinción de fondo, e incluso la prevención de la verdadera unión antígeno-anticuerpo.
Dado que los anticuerpos y los sistemas de detección utilizados en IHQ son en su mayoría reactivos basados en proteínas, son susceptibles a la unión de proteínas no específicas.
La unión de anticuerpos no específicos a los receptores Fc endógenos o una combinación de interacciones iónicas e hidrofóbicas también pueden conducir a la formación de fondo; la tinción y los bloqueadores de proteínas mitigan esta actividad de unión errónea al competir por los sitios de unión de proteínas no específicos en la muestra.
Los bloqueadores pueden utilizar soluciones de suero, soluciones de proteínas o compuestos patentados sin proteínas para hacer esto, al aplicar bloqueadores de suero, se utiliza suero de la especie fuente del anticuerpo secundario.
Por ejemplo, el suero de cabra se utilizaría si el protocolo tuviera un anti de cabra o ratón secundario, en el caso de los bloqueadores a base de proteínas, la caseína de proteína de leche purificada es popular, Biocare Medical ofrece suero y sin suero de bloqueadores para uso manual y automatizado.
Mientras que un bloqueo insuficiente conduce a una tinción de fondo, un bloqueo excesivo puede interferir entre la unión del anticuerpo y el antígeno.
Para no ser específico se reduzcan las interacciones y no se limite la unión anticuerpo-antígeno, se requiere optimización para garantizar que se obtenga la mayor relación señal-ruido logrado una alta proporción de señal a ruido y esto indica un ensayo bien optimizado.
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