Así como varias proteínas diana (epítopos) existen 'naturalmente' dentro del material de la muestra, también existen moléculas de inmunoglobulina (Ig) (intactas), 'porciones' de Ig (conocidas como fragmentos Fc) y receptores Fc, a los que se hará referencia en el resto de este documento como "proteínas pegajosas" (SP).
Dado que los anticuerpos primarios y muchos sistemas de detección comúnmente empleados incorporan anticuerpos primarios y secundarios contra roedores, es decir, ratones y ratas, estos reactivos sin duda pueden unirse a las SP. Sin embargo, dicha tinción no es 'discreta' o específica, es decir, se limita al citoplasma, la membrana y/o el núcleo de una célula en particular, sino que se observa como "fondo", lo que puede, en algunas situaciones, ser tan significativo como para dificultar la interpretación de la tinción deseada.
Dado que la detección de anticuerpos producidos en ratones y ratas se realiza ocasionalmente en muestras obtenidas de modelos de roedores de enfermedades humanas, es útil para comprender la reacción esperada (pero indeseable) entre los SP y los anticuerpos primarios/secundarios, la Figura 1 demuestra cómo estos reactivos pueden unirse a las muestras.
¿Se requiere bloqueo de SP?
Aunque no se requieren procedimientos de 'bloqueo' de SP, la tinción casi siempre mejora cuando se incluyen dichos pasos, dependiendo de la naturaleza de la proteína diana y la especificidad/sensibilidad del sistema de detección. La mejor manera de determinar si dicho bloqueo es necesario es realizar reacciones de tinción 'lado a lado'; si se mejora la tinción, entonces, claramente, el bloqueo debe realizarse de manera continua.
Aplicación práctica de estos principios
Entonces, ¿cómo se incorporan los procedimientos de bloqueo descritos anteriormente en un protocolo de tinción IHQ dado, manual o automatizado? ¡Eso es fácil! Rodent Block-RTM*, diseñado para bloquear IgG de rata endógena y fondo no específico en tejido de rata y glóbulos rojos, se aplica antes de la aplicación de la solución de anticuerpo primario y, si es necesario, antes de la aplicación del reactivo secundario de anticuerpo-polímero-enzima (p. ej. Mouse-On-Rat** de Biocare si se utiliza un anticuerpo primario de ratón o Rabbit on Rodent*** si se utiliza un anticuerpo primario de conejo).
El diagrama que se muestra en la Figura 2 a continuación pretende demostrar el modo de acción de los agentes bloqueadores de SP. Un protocolo de muestra que incorpora estos Los pasos adicionales se muestran en la Figura 3 a continuación.
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