Existen numerosos factores que deben tenerse en cuenta al preparar tejido para la tinción IHC; debido a la diversidad de tejidos y medios que pueden estar involucrados, existe una variabilidad significativa en la preparación de muestras y no hay una respuesta única para las mejores prácticas.
Sin embargo, se pueden identificar algunos factores clave que contribuyen. Un factor que a menudo se pasa por alto es el espesor del corte.
La cantidad de luz que se permite pasar a través del tejido es fundamental para el examen microscópico, esto está parcialmente controlado por el grosor de la sección, que afecta el contraste, la nitidez y los detalles morfológicos del tejido bajo el microscopio, influyendo así en gran medida en la calidad de la tinción.
Generalmente, las secciones más gruesas demuestran una mayor intensidad de tinción debido a que hay más proteínas presentes y marcadas en una estructura tridimensional más gruesa.
Por ejemplo, una sección de 7 zwm tendrá una mayor intensidad de tinción en comparación con una sección de 4 µm. Además, lo que es visible en una sección de 7 µm de espesor puede faltar en una sección de 4 µm de espesor, ya que hay menos tejido presente.
Otra área a considerar en el espesor del corte es cómo afecta el contenido y la composición del bloque. Las células pueden variar en tamaño de 1 a 100 µm.
En los mamíferos, los orgánulos y componentes celulares varían de manera similar en tamaño, un ribosoma puede tener 0,2 µm de diámetro, mientras que el núcleo de una célula puede tener un diámetro de 6 µm. Como resultado, las secciones de diferentes tamaños representarán visualmente mejor los diferentes componentes celulares, como la membrana, el citoplasma o el núcleo.
Las secciones de tejido >5 µm pueden producir más variación en la intensidad de la tinción y facilitar la evaluación de la tinción citoplasmática y de la membrana, más complejo que el de la tinción nuclear.
La preservación del tejido y el medio de inclusión también deben ser considerado al determinar el espesor de la sección. El tejido se fabrica más firme por el proceso de fijación para preservar su estructura y luego puede estar infiltrado con un medio, como cera o plástico, para soportarlo, o puede estar fresco congelado. El espesor de la sección suele oscilar entre 8 y 15 µm para secciones congeladas, 4–10 µm para secciones de cera y 0,5–3 µm para cortes histológicos plásticos. Para la tinción IHC, se cortan secciones entre 3-5 µm.
El espesor del corte a menudo se pasa por alto como un factor en la tinción IHC resultados, pero siempre se debe considerar en términos de tejido, conservación, medio de inclusión y calidad de la tinción
1 A un como mínimo, la coherencia en el corte es fundamental para la calidad del atención al paciente para evitar la variabilidad y los resultados confusos.
Seccionamiento El grosor tiene implicaciones importantes en la atención médica, tanto ahora como en el futuro a medida que la patología de la imagen digital se vuelva más prominente.
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