Solución de problemas: Cubreobjetos

Entonces, lo has logrado! Has creado con éxito una tinción  fuerte y nítida  de forma limpia. Todo lo que queda por hacer ahora es aplicar un cubreobjetos y verlo al microscopio.

Sin embargo, como habrás aprendido, nada en inmunohistoquímica (IHC) es tan simple. Tu elección de medio de montaje y el cubreobjetos tendrán un efecto directo en su capacidad para visualizar el portaobjetos, independientemente de la tinción.

El montaje y el cubreobjetos tienen un doble propósito en microscopía, primero protegen la sección de tejido de dañarse; él cubreobjetos debe ser grande, suficiente para cubrir la sección de tejido por completo, y se debe aplicar la cantidad apropiada de medio de montaje en la dilución correcta.

Si elmedio es demasiado escaso o demasiado diluido, se retraerá de los bordes del cubreobjetos a medida que se seca, dejando partes de la sección expuestas al aire, como se ve en la figura 1.1

En segundo lugar, el montaje y el cubreobjetos mejoran la claridad visual al controlar la refracción de la luz alrededor del tejido. En otras palabras, el montaje el medio y el cubreobjetos doblarán idealmente la luz de una manera que haga que la sección teñida sea claramente visible debajo de ellos.

La medida en que la sustancia desvía la luz se mide por un valor conocido como su índice de refracción (IR). Si los IR del material del cubreobjetos y los medios de montaje son demasiado diferentes, la falta de coincidencia en sus ángulos de refracción creará aberraciones ópticas, reduciendo la claridad.

Esta es también la razón por la cual las burbujas de aire (RI1.0) o las gotas de agua (RI 1.3) pueden ser tan perjudiciales visualmente debajo de un cubreobjetos de vidrio (RI 1.5).  Como tal, los técnicos deben verificar los RI de sus cubreobjetos y materiales de montaje y evitar que el aire o el agua queden atrapados debajo del cubreobjetos.

Además, los medios de montaje deben conservar la calidad de la tinción. Se debe tener cuidado al elegir los medios de montaje para asegurarse de que los marcajes cromogénicos no estén expuestos a sustancias que puedan dañarlos. Por ejemplo, algunos cromógenos pueden perder su color cuando se exponen a sustancias orgánicas solventes, por lo que debe montarse con un medio de montaje acuoso.

Por ejemplo, EcoMount de Biocare es un medio de montaje a base de polímeros, para portaobjetos IHC que no contiene solventes orgánicos como el xilol.

Otros medios de montaje evitan la decoloración en marcas fluorescentes, como el de BiocareFluoro Care Anti-Fade Mountant, que está especialmente diseñado para conservar muestras fluorescentes, prolongando su vida útil. Con la gran variedad de medios de montaje disponibles en el mercado, los técnicos siempre deben verificar las especificaciones de sus reactivos de tinción y medios de montaje para asegúrese de que sean compatibles.

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Figura 1 El artefacto de retracción se puede ver en esta imagen de diapositiva De Histotechnology: A Self-Instructional Text (p. 131), de Carson, F. L. y Cappellano, C. H., 2009, Estados Unidos: American Society for Prensa de Patología Clínica.

Derechos de autor 2009

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Para obtener más información sobre cómo los medios de montaje de Biocare Medical pueden beneficiar a su laboratorio, visítenos en biocare.net o llame al 1-800-799-9499.

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