Solución de problemas: Fijación

Como primer paso preparatorio en el proceso de inmunohistoquímica (IHC), la fijación adecuada del tejido es fundamental. La fijación asegura que el tejido la estructura y composición celular se conservan para su visualización. El fijador ideal endurecerá el tejido para preservar estas estructuras y al mismo tiempo evitando la degradación del tejido.

Cualquier error en el proceso de fijación afectará la calidad de la tinción de todos los demás pasos posteriores. Los problemas de tinción más graves son el resultado de una fijación tardía o incompleta. El proceso debe ser completado por la solución fijadora, evitando la putrefacción y la autólisis.

La putrefacción ocurre cuando bacterias u hongos afectan el tejido. La autólisis es la autodigestión o autodestrucción de una célula mediante la acción de sus propias enzimas. De forma natural, las enzimas presentes en el tejido continuarán sus procesos metabólicos incluso después de que se extraiga el tejido, descomponiendo los componentes del tejido hasta que sean inhibidas por el fijador.

Si se retrasa la fijación y se permite que ocurra cualquiera de estos procesos, las estructuras celulares pueden perderse irremediablemente. Las bacterias u hongos pueden ser visibles en la tinción, si están presentes. Si el tejido se autoliza, algunas células pueden desaparecer y los componentes del tejido pueden parecer que se encogen, creando un espacio artificial alrededor de las células.

Incluso después de colocar el tejido en la solución fijadora de manera oportuna, se debe dar suficiente tiempo para que el fijador penetre completamente el tejido y para que tenga lugar la acción fijadora. Para la fijación con formalina, la penetración se produce a una velocidad aproximada de 1 mm por hora.

Puede tomar hasta 24 a 48 horas para que se complete la reticulación inicial después de lograr la penetración total.

Si la muestra es demasiado grande, con área de superficie insuficiente en relación con el volumen, impedirá la penetración y la fijación puede retrasarse o ser incompleta. El Tejido que muestra signos de la fijación incompleta parecerá tener una morfología deficiente. Los núcleos pueden aparecer borrosos o parecer "burbujear" cuando se tiñen.

Desafortunadamente, las células dañadas o perdidas no se pueden recuperar. Si se observan estos artefactos en la muestra, los procesos deben ser inmediatamente mejorado. Las muestras de tejido deben colocarse en una solución fijadora directamente después de la extracción en un volumen de 15 a 20 veces mayor que el del tejido.

Y la solución debe cambiarse con frecuencia. Los tejidos como el útero o el tracto gastrointestinal deben abrirse para que el fijador pueda entrar en contacto directo con todas las superficies. Las muestras de tejido más grandes deben cortarse en rodajas finas para garantizar la penetración total del fijador, y los casetes no deben empaquetarse muchos a la vez.

Por el contrario, es posible que el tejido se fije en exceso. Para la fijación con formalina, pasar demasiado tiempo en el fijador resultará gradualmente en la la formación de enlaces cruzados covalentes estables y una gran cantidad de enlaces covalentes impedirán la recuperación suficiente del antígeno, lo que producirá resultados falsos negativos.

Los efectos de la fijación prolongada y el grado en que se pierde la inmunorreactividad pueden depender del antígeno de interés.

Siempre se deben seguir las pautas reglamentarias oficiales para la fijación. Para evitar errores, el momento en que se coloca una muestra en el fijador debe ser registrado, así como el tiempo total que el tejido pasó en el fijador.

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